Nuovo kit di rilevamento dell'acido nucleico del coronavirus (SARS-Cov-2).

New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit

(Flumineralescent RT-PCR Probe Method) Product Manual

【Product name 】Nuovo kit di rilevamento dell'acido nucleico del coronavirus (SARS-Cov-2) (metodo con sonda fluorescente RT-PCR)

【Packaging specifications 】25 test/kit

【Intended usetà】

Questo kit viene utilizzato per il rilevamento qualitativo dell'acido nucleico del nuovo coronavirus in tamponi nasofaringei, tamponi orofaringei (gola), tamponi nasali anteriori, tamponi turbinati medi, lavaggi nasali e aspirati nasali di soggetti sospettati di COVID19 dal loro medico. Il rilevamento dei geni ORF1ab e N del nuovo coronavirus può essere utilizzato per la diagnosi ausiliaria e il monitoraggio epidemiologico dell’infezione da nuovo coronavirus.

【Principles of the procedure 】

Questo kit è progettato per sonde TaqMan specifiche e primer specifici progettati per le sequenze del gene ORF1ab e N del nuovo coronavirus (SARS-Cov-2). La soluzione di reazione PCR contiene 3 set di primer specifici e sonde fluorescenti per il rilevamento specifico dei target, mentre un set aggiuntivo di primer specifici e sonde fluorescenti viene utilizzato come controllo standard interno del kit per il rilevamento dei geni housekeeping endogeni.

Il principio del test è che la sonda fluorescente specifica viene digerita e degradata dall'attività dell'esonucleasi dell'enzima Taq nella reazione PCR, in modo che il gruppo fluorescente reporter e il gruppo fluorescente spento siano separati, in modo che il sistema di monitoraggio della fluorescenza possa ricevere una sonda fluorescente segnale, e quindi attraverso l'effetto di arricchimento dell'amplificazione PCR, il segnale di fluorescenza della sonda raggiunge un valore soglia impostato-valore Ct (soglia del ciclo). In caso di assenza di amplicone target, il gruppo reporter della sonda è vicino al gruppo quench. A questo punto, avviene il trasferimento di energia di risonanza della fluorescenza e la fluorescenza del gruppo reporter viene attenuata dal gruppo quench, in modo che il segnale fluorescente non possa essere rilevato dallo strumento PCR fluorescente.

Per monitorare l'utilizzo dei reagenti durante il test, il kit è dotato di controlli positivi e negativi: il controllo positivo contiene il plasmide ricombinante del sito target e il controllo negativo è acqua distillata, utilizzata per monitorare l'inquinamento ambientale. Si consiglia di impostare contemporaneamente un controllo positivo e un controllo negativo durante il test.

【Main components 】

Nota:(1) I componenti di kit batch diversi non possono essere mescolati o scambiati.

(2) Preparare il proprio reagente: kit di estrazione dell'acido nucleico.

【Storage conditons E expiration date 】

For BST-SARS-25:Trasportare e conservare a lungo a -20±5℃.

For BST-SARS-DR-25:Trasporto a temperatura ambiente. Conservare a -20±5℃ per lungo tempo.

Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento. Il periodo di validità è indicativamente fissato a 12 mesi.

Vedere l'etichetta per la data di produzione e utilizzo.

Dopo la prima apertura, il reagente può essere conservato a -20±5 °C per non più di 1 mese o fino alla fine del periodo del reagente, a seconda di quale data si verifichi per prima, per evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento e il numero di cicli di congelamento del reagente -i cicli di scongelamento non devono superare le 6 volte.

【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.

【Sample requirements 】

1.Tipo di campione applicabile: soluzione di acido nucleico estratto.

2. Conservazione e trasporto dei campioni: conservare a una temperatura di -20±5 ℃ per 6 mesi. Congelare e scongelare i campioni non più di 6 volte.

【Testing metohd】

1.Nucleic acid extraction

Selezionare un kit di estrazione dell'acido nucleico adatto per estrarre l'acido nucleico virale e seguire le istruzioni del kit corrispondente. Si consiglia di utilizzare un kit di estrazione e purificazione dell'acido nucleico prodotto da Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. o un kit di purificazione dell'acido nucleico equivalente.

2.  Rcadtion reagent preparation

2.1 For BST-SARS-25:

(1) Rimuovere la miscela SARS-Cov-2 e la miscela enzimatica, scioglierle completamente a temperatura ambiente, mescolare accuratamente con il dispositivo Vortex e quindi centrifugare brevemente.

(2) 16,5 µL di miscela enzimatica sono stati aggiunti a 358,5 µL di miscela SARS-Cov-2 e miscelati accuratamente per ottenere la soluzione di reazione mista.

(3) Preparare una provetta PCR pulita da 0,2 mL e contrassegnarla con 15 µL della soluzione di reazione mista di cui sopra per pozzetto.

(4) Aggiungere 15 μL di soluzione di acido nucleico purificato, il controllo positivo e il controllo negativo e coprire con attenzione il tappo della provetta ottale.

(5) Mescolare bene capovolgendo la provetta e centrifugare rapidamente per concentrare il liquido sul fondo della provetta.

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